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ELISA實驗結束后,數據結果如何正確解讀?
ELISA實驗結束后,需先確認實驗有效性,再結合檢測類型完成結果解讀,步驟如下:
一、先驗證實驗有效性
檢查標準曲線?:定量實驗的標準曲線相關系數?R2需≥0.98?,優先用四參數對數擬合,否則結果可信度不足。
核對對照孔?:陰性對照OD值不能過高,陽性對照需出現明確信號,無信號說明實驗體系失效。
評估復孔精度?:復孔間變異系數CV需<10%,超出則提示操作誤差過大。
二、按檢測類型解讀結果
定性檢測?:將樣本校正OD值(樣本OD-空白OD)和試劑盒標注的?Cut-off臨界值?對比,大于臨界值為陽性,小于則為陰性,臨界附近樣本建議重復檢測。
半定量檢測?:通過梯度稀釋得到能產生陽性反應的最高稀釋倍數即效價,效價越高代表樣本中目標物反應能力越強。
定量檢測?:用校正OD值代入合格的標準曲線算出濃度,若樣本提前稀釋,最終結果需乘以對應稀釋倍數;OD值超出曲線范圍的樣本,調整稀釋倍數后重測。本生BUNSEN 試劑盒
三、ELISA結果判讀核對清單
1、實驗系統有效性核對)
標準曲線?R2 ≥ 0.99?,OD值隨濃度梯度有序下降,無跳點
空白對照OD值 ?< 0.2?,無異常顯色
陽性對照結果落在試劑盒給定參考范圍內,P/N值≥2.1
陰性對照OD值接近空白,無明顯偏高,提示無非特異性強結合
所有試劑均在有效期內,無混用不同批次試劑的情況
2、樣本數據質量核對
所有樣本復孔CV值 ?< 15%?,無差異過大的跳孔
樣本OD值全部落在標準曲線的線性范圍內,無“爆表"或接近0的值
3、常見異??焖倥挪?/p>
全板無顯色:優先檢查酶標物活性、底物是否漏加、酶是否失活
整板背景過高:排查封閉是否充分、洗滌次數是否達標、樣本是否有干擾物
復孔差異大:檢查加樣是否帶氣泡、槍頭是否堵塞、孵育是否有蒸發差異
假陽性/假陰性:確認樣本是否需要稀釋、是否存在交叉反應、目標物是否低于檢測下限
注:以上科研產品資料供參考!
本生BUNSEN一直視質量控制為企業的生命,追求企業競爭力的不斷提升。公司在經營中始終秉承:遵紀守法,嚴于律己,寬仁以待,敢于承擔的企業精神作為標準,以過硬的質量和優良的服務來維護和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,共創美好的未來。